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設(shè)置熒光分光光度計的狹縫要注意哪些事項

發(fā)布日期: 2020-11-26
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  熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器
。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度
、量子產(chǎn)率
、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)
,從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況
。通過對這些參數(shù)的測定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化
,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系
。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm
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、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
  熒光強(qiáng)度跟很多因素有關(guān)
,如分子結(jié)構(gòu)
、存在狀態(tài)、溶液濃度或薄膜厚度
、溫度
、選擇的激發(fā)波長、測試狹縫寬度等因素
。熒光強(qiáng)度在不同儀器上的測量值存在較大差異
,不具有可比性,但是其峰位還是較容易確定的
,可以用來判斷何種物質(zhì)
。進(jìn)行熒光定量分析,必須固定一些條件
  狹縫的大小對熒光強(qiáng)度很重要
,狹縫大小可根據(jù)你所測物質(zhì)的熒光強(qiáng)度大小作出適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。在同一濃度
,如熒光強(qiáng)度過大
,超過儀器量程,可減小狹縫
。但是
,需要指出的是,不能僅憑狹縫的大小來改變熒光強(qiáng)度
,還要考慮分辨率的問題
。對于熒光掃描而言,狹縫加大可以使熒光強(qiáng)度提高同時重現(xiàn)性得到提高
,但是分辨率隨之降低
。狹縫決定分辨率,儀器其它結(jié)構(gòu)已經(jīng)固定(光柵的刻線數(shù)
、焦距以及綜合的線色散系數(shù))
,狹縫大小就決定分辨率的高低。對于實際使用
,狹縫大小需要和測定的峰的半峰寬相匹配
,過大,峰就變形了
。狹縫大小也決定了光通量大小。按照經(jīng)驗數(shù)值
,狹縫開大1倍
,光通量將增大4倍
。  
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