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？

如何選擇熒光分光光度計(jì)的濾光片？

發(fā)布日期： 2020-11-24
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    熒光分光光度計(jì)在使用時
，需要注意開機(jī)次序
，以保護(hù)設(shè)備之間不受影響。熒光光譜儀開機(jī)順序一般為先開氙燈
，然后開儀器主機(jī)
，后開跟儀器連接的計(jì)算機(jī)。如此操作的原因在于穩(wěn)態(tài)氙燈是高壓點(diǎn)亮
，為了避免瞬問脈沖電流對周圍設(shè)備造成影響
，需要先開氙燈，等電流穩(wěn)定后再打開周邊的電腦等設(shè)備
。關(guān)機(jī)順序則相反
。
　　熒光定量分析多采用工作曲線法，即以已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
，按試樣相同方法處理后
，配成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定其相對熒光強(qiáng)度和空白溶液的相對熒光強(qiáng)度
；扣除空白值后
，以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)
，繪制工作曲線
；然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液，在同一條件下測定其相對熒光強(qiáng)度
，扣除空白值后
，從工作曲線上求出熒光物質(zhì)的含量。
如何選擇熒光分光光度計(jì)的濾光片
？
　　在進(jìn)行發(fā)射圖譜掃描分析時
，根據(jù)斯托克斯定律，設(shè)置的激發(fā)波長要比發(fā)射波長短，例如
，激發(fā)波長λex=260nm
，則發(fā)射起始波長應(yīng)該從大于260nm的波長開始，比如270nm
，發(fā)射結(jié)束波長為870nm
。這樣一來，在激發(fā)光的2倍波長(520nm)
、3倍波長(780nm)處都會出現(xiàn)激發(fā)波長的尖銳的倍頻峰
，若與熒光光譜峰重疊，將會對測試產(chǎn)生干擾
，需選用合適的濾光片將其濾掉
。
　　倍頻峰就是激發(fā)光的散射峰，雖然波長掃描到雙倍波長的時候出現(xiàn)
，但實(shí)際波長卻是激發(fā)波長
，可以通過增加高通濾光片來去除倍頻峰。高通濾光片一般放在發(fā)射處
，片上都標(biāo)明其可以濾除的大波長
。也就是說，體系中增加高通濾光片后
，比其上所標(biāo)波長低的光
，也包括這些光的二倍波長光、三倍波長光
，會被濾掉；而比其所標(biāo)波長高的光則可以順利通過
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