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說一說數字PCR的擴增過程

發(fā)布日期： 2020-05-13
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　　數字PCR是近年來迅速發(fā)展起來的一種定量分析技術
。與傳統定量PCR技術不同的是數字PCR不依賴于擴增曲線的循環(huán)閾值(CT)進行定量,不受擴增效率的影響,也不必采用看家基因和標準曲線,具有很好的準確度和重現性,可以實現定量分析。迄今為止,已有Fluidigm
、Bio-Rad等相繼推出了數字PCR儀器
，已經在單細胞分析、癌癥早期診斷和產前診斷等研究領域顯示出巨大的技術優(yōu)勢和應用前景
。
　　PCR實際上是一個在模板DNA
、引物(模板片段兩端的已知序列)和四種脫氧核苷酸等存在的情況下，DNA聚合酶依賴的酶促合成反應，擴增的特異性取決于引物與模板DNA的持異結合
。
　　整個擴增過程分三步：
　　1
、變性：使DNA雙鏈解離，形成兩條單鏈
；
　　2
、退火：溫度下降后模板DNA與引物按氨堿基配對原則互補結合，也可能存在兩條模板鏈之間的結合
，但由于引物的高濃度
、結構簡單等特點，結合主要發(fā)生在模板與引物之間
；
　　3
、延伸：在DNA聚合酶及鎂離子等存在的條件下，從引物的3"端開始
，結合單核苷酸
，形成與模板鏈互補的新DNA鏈。上述幾步為一個循環(huán)
，從理論上講
，每經過1個循環(huán)，樣本中的DNA應該增加一倍
，新形成的鏈又可成為新一輪循環(huán)的模板
。第2個循環(huán)開始后，模板鏈增加—倍
。經過25—30個循環(huán)后DNA可擴增10的6次方至9次方倍
。
　　
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