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島津熒光分光光度計(jì)的基本原理

發(fā)布日期: 2020-03-26
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  島津熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器
。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度
、量子產(chǎn)率
、熒光壽命
、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況
。通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定
,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化
,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系
。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍是200~800nm
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?捎糜谝后w、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描
。熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)
,自動(dòng)記錄式熒光分光光度計(jì),計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段
  由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中
,激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光,熒光經(jīng)過(guò)濾過(guò)和反射后
,被光電倍增管所接受
,然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來(lái)。
  物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài),這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過(guò)程中將一部分的能量又以光的形式放出
,從而產(chǎn)生熒光.
  不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級(jí)的分布具有各自不同的特征
,這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜;
,因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來(lái)定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定
  在溶液中,當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見(jiàn)分光光度法類似
,熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行
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