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使用熒光分光光度計(jì)要注意這幾點(diǎn)操作

發(fā)布日期： 2021-08-30
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　　熒光光譜法具有靈敏度高
、選擇性強(qiáng)、用樣量少
、方法簡便
、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)
、醫(yī)學(xué)
、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域
。熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)
，自動記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì).光分光光度計(jì)三個(gè)階段;熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列
。
　　熒光強(qiáng)度容易受外界因素的影響
，如樣品池、激發(fā)光源
、溫度
、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)
、其它溶質(zhì)
、表面活性劑等都會造成熒光強(qiáng)度的變化
。嚴(yán)格控制測試條件對熒光分析來說至關(guān)重要。
　　熒光分光光度計(jì)測試的注意事項(xiàng)有哪些：
　?div id="jfovm50" class="index-wrap">、贅悠窇?yīng)盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中
，如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。
　?div id="jfovm50" class="index-wrap">、谠跓晒夥治鰰r(shí)
，為了得到穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開機(jī)預(yù)熱氙燈大約30min
。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈
，預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10min左右。對某些易感光
、易分解的熒光物質(zhì)
，盡量采用長波長、低人射光強(qiáng)度及短時(shí)間光照
。
　?div id="jfovm50" class="index-wrap">、蹨囟茸兓梢馃晒鈴?qiáng)度的改變。通常降低溫度
，有利于提高熒光量子產(chǎn)率
，熒光強(qiáng)度增大。溫度影響熒光強(qiáng)度的顯著程度因樣品而異
，大部分熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大
，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結(jié)果幾乎無影響
。
　?div id="jfovm50" class="index-wrap">、墚?dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時(shí)，溶液的pH對熒光強(qiáng)度有較大影響
。因?yàn)槿跛峄蛉鯄A在不同酸度中
，分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變
。以苯胺為例：在pH=7～12的溶液中會產(chǎn)生藍(lán)色熒光
，在pH<2或ph>13的溶液中都不產(chǎn)生熒光。再如
，維生素B2（核黃素）在430～440nm藍(lán)光照射下會發(fā)出綠色熒光
，λem為535nm。它在pH=6～7的溶液中熒光強(qiáng)度大
，而在pH=11時(shí)熒光消失
；但在堿性溶液經(jīng)光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會生成熒光強(qiáng)度比維生素B2強(qiáng)得多的黃光素，并可溶于
。利用此性質(zhì)可提高測定的靈敏度和選擇性
。
　?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">、莘肿咏Y(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著增強(qiáng)
。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強(qiáng)度
。
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